附件二、FAQ

 

1. 非损伤微测技术是一种什么样的技术？

非损伤微测技术是在近似生理条件的液体环境里，通过实时测量离子或分子进出活体材料的动态流速，反映该材料相关基因和蛋白质生理功能的技术。 对活体材料进行实时动态的测定是生命科学的发展趋势，也是科学仪器的发展方向。

非损伤微测技术是实时、动态的测定活体材料的技术，通过测定进出活体材料的离子和小分子的流速这一指标反映生命活动，是生理功能研究的最佳工具之一。

非损伤微测技术与其他活体测定技术有所不同，不受被测材料的限制，能够获得离子和小分子的空间运动大小和方向，具有广阔的应用前景。

 

2.非损伤微测技术测定的指标是什么？

非损伤微测技术测定的是离子和小分子的流速，包括离子和小分子流动程度的大小和流动的方向，具有时间性和空间性的特征，即流速能够反映离子和小分子的流动行为随着时间、空间变化而产生的改变。

非损伤微测技术目前测定已经非常成熟的离子有：Ca²⁺、H⁺、Na⁺、K⁺、Cl^-、NH₄⁺、NO₃^-、Cd²⁺、Mg²⁺；小分子有：O₂、H₂O₂。

更多的离子和小分子的测定在进一步开发中，如IAA、NO、Glucose、Zn²⁺、Fe³⁺等。

非损伤微测技术获得的流速的单位是：10^-12 mol · cm^-2 · s^-1

 

3. 什么是流速（flux）？

3.1 广义的流速

流速是指物质在介质和空间中运动的速度，具有方向性和时间性。

3.2 狭义的流速

流速是指生物体由于内外交换形成的离子和小分子梯度中离子和小分子的运动速度。

注：这里的流速是指生命科学中的流速（flux）。

 

4. 流速的意义是什么？

4.1 流速是活细胞的语言

流速是活细胞信号转导过程的直观反映，是活细胞的语言。

4.2 流速是信号转导/功能的桥梁

流速是基因发挥功能的桥梁，基因表达的指令通过物质的流动进行传递。

4.3 流速是活体生命的本质特征

流速是活体生命的本质特征。

流速概念的引入，推动了生命科学研究从依赖大量前处理实验的传统模式飞跃到简便的活体和动态测量模式，测定流速的工具非损伤微测技术与活体成像技术成为这一模式下最为突出的两项技术。活体测量和活体研究极大地改变了人类对生命活动的认识。

 

注释：

• 实时：快速（以秒为单位）获取、呈现和记录数据
• 动态：长时间、连续不断地测量和获取数据
• 活体材料：具有生命的材料

 

5．应用非损伤微测技术的论文在哪些刊物上发表过？

据不完全统计，非损伤微测技术诞生以来已经在SCI收录的50多种刊物上发表了300多篇论文，以下是一些较有影响力的刊物的名称。

Science、Nature、Nature Protocols、Nature Cell Biology、New Phytologist

PNAS、Plant Cell、Plant Physiology、Plant Journal、Plant, Cell and Environment、Plant Cell and Physiology、Planta、Physiologia Plantarum、Protoplasma、Plant Signaling & Behavior、Plos

Journal of Cell Biology、Journal of Biological Chemistry、Journal of Experimental Botany、Journal of Experimental Biology、Journal of Microbiological Methods、Journal of Biological Engineering、Journal of Neurochemistry、Journal of Neuroscience、Journal of Cell Science、Journal of Physiology、Journal of Membrane Biology

American Journal of Physiology-Cell Physiology、Applied and Environmental Microbiology、Aquatic Toxicology

Biology of Reproduction、BMC Plant Biology、Bone、Biological Bulletin、Biophysical Journal、Biotechnology and Bioengineering、Comparative Biochemistry and Physiology、Diabetes、Development

Eukaryotic Cell、Environmental Science & Technology、FASEB Journal、FEMS Microbiology、Functional Plant Biology

Microbiology、Molecular Neurodegeneration、Molecular Biology of the Cell

Zygote

 

6.从哪里可以购买非损伤微测技术的实验设备——非损伤微测系统？

非损伤微测系统在中国大陆的销售工作由各地经销商负责，目前经销商网络已经覆盖了全国大部分省市自治区。您可以直接联系非损伤微测系统的的本地经销商，如果不清楚谁是经销商请直接联系旭月（北京）科技有限公司（以下简称旭月公司），由旭月公司代为安排。

 

7. 目前有哪些单位购买了非损伤微测系统？

目前国内已经售出十余套非损伤微测系统，包括中国农业科学院下属单位2套、中国科学院烟台海岸带研究所1套、中国林业科学研究院下属单位1套、暨南大学1套、北京林业大学1套、首都师范大学1套、北京市农林科学院下属单位1套及台湾中央研究院下属单位2套。此外，还有超过100位客户以接受测试服务的方式使用非损伤微测系统，这些客户来自北京大学、清华大学、中国农业大学、中国科学院、中国农业科学院、浙江大学、南京农业大学、山东农业大学、山东师范大学、中国人民解放军总医院（301医院）、广州中医药大学、河南大学、厦门大学等全国各地的知名高校和研究机构。

 

8. 非损伤微测系统的售后服务水平如何？

旭月公司拥有一只优秀的售后服务团队，除公司自身经验丰富的技术工程师外，很多国内外知名学者应邀担任了旭月公司的顾问，他们共同为客户提供各种形式的优质售后服务。

旭月公司制定了完善的售后服务流程和规章制度，客户使用非损伤微测系统使用时出现的任何问题联系旭月公司后，旭月公司都会在第一时间提供问题的解决方案。

 

9. 非损伤微测系统能使用多长时间，后续的耗材、试剂贵吗？

非损伤微测系统自身的稳定性极高，使用寿命很长。目前市场在售的非损伤微测系统都是美国原装进口的产品，经过厂家严格检验，质量有保障，完全可以按照国家规定的固定资产最高使用年限估计使用寿命。

非损伤微测系统专用电极

 

相比生命科学领域其他常见仪器，非损伤微测系统后续的耗材、试剂很便宜，完全在可承受的范围内，对此已经购买了非损伤微系统的客户深有体会。

 

10. 如果我暂不购买非损伤微测系统，但希望开展相关的实验，是否有可行的办法？

上文中提到的测试服务非常适合于您。旭月公司设有测试服务中心，只要您设计好实验方案，将实验样品和其他去辅助材料拿到测试服务中心，就可以比较低廉的价格使用中心的非损伤微测系统开展实验。中心配备了专业的技术工程师，无需您亲自操作系统。具体情况请参考旭月公司主页“测试服务”模块或直接咨询旭月公司。

 

11. 非损伤微测系统可测量的对象有哪些？目前测试中心已检测过的样品有哪些？

非损伤微测技术可测量样品的范围较广：整体→器官→组织→细胞层→单细胞→细胞器（富集）。

迄今为止，测试中心测试过的样品种类已超过百种，包括植物类、动物类、微生物类以及非生物类。

植物类：如根、叶片、花粉管、保卫细胞、液泡等。

动物类：如胚胎、胰岛、耳蜗组织、卵细胞等。

微生物类：如丛枝菌根、大肠杆菌、根瘤菌等。

非生物类：如镁合金、陶瓷、碳钢、铝合金等。

 

12. 非损伤微测技术实验涉及到的测试液和校正液是什么？测试液和校正液设计时需要遵循的原则有哪些？

测试液是指测试时样品所处的液体环境。

校正液是指用来校正电极的溶液，原则上尽量和测试液相似。高浓度校正液和低浓度校正液的待测离子浓度范围应该是包含测试液中待测离子的浓度，高低校正液浓度一般相差10倍（一些分子除外）。

注意：测试液中的离子浓度是指溶液所有成分中同一种离子的浓度总和。

 

测试液和校正液设计时需要遵循以下原则：

（1）测试液可尽量和样品的培养液一致，保证样品的活性。

（2）测试液中应该含有所测定的离子（特殊的研究，如先用没有所测定离子的溶液，然后再加入此种离子的实验情况除外）。

（3）测试液中待测离子的浓度不宜过高，尽量维持在一个较低的水平（例如1mM以内）。

（4）测试液尽量维持一定的渗透压和pH值，以保证样品的活性。

（5）不同的校正液之间的浓度一般相差10倍（特殊的分子除外）。

（6）测试液和校正液最好用相应成分的母液（例如：100倍的母液）稀释进行配制，避免直接称量误差较大，导致浓度不准确，影响校正和测试。

（7）测试液和校正液pH的调节需注意，不能用含有待测离子的酸或碱调节，如测定Na⁺时调节pH值不能用NaOH，否则就使溶液中的Na⁺含量增加，可用较少量的KOH调节，最好用氯化胆碱或Tris。

 

13. 非损伤微测技术实验中获取的数据是什么？它们的含义是什么？

通过实例予以说明：下图为非损伤微测系统同时测定植物根K⁺和H⁺的流速时数据采集软件的截图。

图中红色的线代表H⁺，绿色的线代表K⁺，所记录数据为样品离子的流速或者是距样品两点间的电压差ΔV（μV）（纵坐标），横坐标为记录的时间，在零线上方（正值）的曲线是指离子外流（Efflux），零线下方的曲线是指离子内流（Influx），白色点是指进行了一个刺激处理，当受到刺激处理后，H⁺和K⁺的外流增加。

 

14.如果非损伤微测技术实验数据不够理想，一般是什么原因造成的？如何发现问题？

数据不够理想的最可能原因是被测样品的活性状态不佳，其次是配制的测试液存在问题。当然也可能是测试系统本身存在故障，但这种可能性很小，而且很容易及时发现和纠正。

为确认测试中问题产生的原因，可进行人工离子源实验。在相应的测试溶液中进行人工离子源实验，若能观察到正常浓度梯度反应曲线则基本可以排除系统故障的可能性。

注意：样品间某些离子可能存在个体间的差异，因此测试时会出现重复性不好的情况，这种情况需要从样品和测试液本身入手寻求解决的办法。