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附录2:常问解答(FAQ)

1. 非损伤微测技术是一种什么样的技术?

非损伤微测技术是在近似生理条件的液体环境里,通过实时测量离子或分子进出活体材料的动态流速,反映该材料相关基因和蛋白质生理功能的技术。 对活体材料进行实时动态的测定是生命科学的发展趋势,也是科学仪器的发展方向。

非损伤微测技术是实时、动态的测定活体材料的技术,通过测定进出活体材料的离子和小分子的流速这一指标反映生命活动,是生理功能研究的最佳工具之一。

非损伤微测技术与其他活体测定技术有所不同,不受被测材料的限制,能够获得离子和小分子的空间运动大小和方向,具有广阔的应用前景。

2.非损伤微测技术测定的指标是什么?

非损伤微测技术测定的是离子和小分子的流速,包括离子和小分子流动程度的大小和流动的方向,具有时间性和空间性的特征,即流速能够反映离子和小分子的流动行为随着时间、空间变化而产生的改变

非损伤微测技术目前测定已经非常成熟的离子有:Ca2+、H+、Na+、K+、Cl-、NH4+、NO3-、Cd2+、Mg2+、Pb2+;小分子有:O2、H2O2、IAA、葡萄糖、谷氨酸。

更多的离子和小分子的测定在进一步开发中,如NO、Zn2+、Fe3+等。

非损伤微测技术获得的流速的单位是:10-12 mol • cm-2 • s-1

3. 什么是流速(flux)?

3.1 广义的流速

流速是指物质在介质和空间中运动的速度,具有方向性和时间性。

3.2 狭义的流速

流速是指生物体由于内外交换形成的离子和小分子梯度中离子和小分子的运动速度。

注:这里的流速是指生命科学中的流速(flux)。

4. 流速的意义是什么?

4.1 流速是活细胞的语言

流速是活细胞信号转导过程的直观反映,是活细胞的语言。

4.2 流速是信号转导/功能的桥梁

流速是基因发挥功能的桥梁,基因表达的指令通过物质的流动进行传递。

4.3 流速是活体生命的本质特征

流速是活体生命的本质特征。

流速概念的引入,推动了生命科学研究从依赖大量前处理实验的传统模式飞跃到简便的活体和动态测量模式,测定流速的工具非损伤微测技术与活体成像技术成为这一模式下最为突出的两项技术。活体测量和活体研究极大地改变了人类对生命活动的认识。

    注释:
  • 实时:快速(以秒为单位)获取、呈现和记录数据
  • 动态:长时间、连续不断地测量和获取数据
  • 活体材料:具有生命的材料

5.应用非损伤微测技术的论文在哪些刊物上发表过?

       据不完全统计,非损伤微测技术诞生以来已经在SCI收录的50多种刊物上发表了300多篇论文,以下是一些较有影响力的刊物的名称。

Science、Nature、Nature Protocols、Nature Cell Biology、New Phytologist

PNAS、 Plant Cell、Plant Physiology、Plant Journal、Plant, Cell and Environment、Plant Cell and Physiology、Planta、Physiologia Plantarum、Protoplasma、Plant Signaling & Behavior、Plos One

Journal of Cell Biology、Journal of Biological Chemistry、Journal of Experimental Botany、Journal of Experimental Biology、Journal of Microbiological Methods、Journal of Biological Engineering、Journal of Neurochemistry、Journal of Neuroscience、Journal of Cell Science、Journal of Physiology、Journal of Membrane Biology

American Journal of Physiology-Cell Physiology、Applied and Environmental Microbiology、Aquatic Toxicology

Biology of Reproduction、BMC Plant Biology、Bone、Biological Bulletin、Biophysical Journal、Biotechnology and Bioengineering、Comparative Biochemistry and Physiology、Diabetes、Development

Eukaryotic Cell、Environmental Science & Technology、FASEB Journal、FEMS Microbiology、Functional Plant Biology

Microbiology、Molecular Neurodegeneration、Molecular Biology of the C

Zygote

6. 非损伤微测系统有哪些型号?不同型号有哪些功能?

非损伤微测系统分为美国原装进口系统和国内组装系统两大系列,分为以下型号:

美国原装进口系统:

NMT100-I-YG或NMT200-I-YG(功能:同一时间只能测量一种离子的信号)

NMT100-IM-YG或NMT200-IM-YG(功能:同一时间只能测量一种离子或一种分子的信号)

NMT100-SIM-YG或NMT200-I-SIM-YG(功能:既可单独测量离子或分子,也可在同一时间测量两种信号)

国内组装系统(国产):

NMT100-I-XY或NMT200-I-XY(功能:同一时间只能测量一种离子的信号)

NMT100-IM-XY或NMT200-IM-XY(功能:同一时间只能测量一种离子或一种分子的信号)

NMT100-SIM-XY或NMT200-I-SIM-XY(功能:既可单独测量离子或分子,也可在同一时间测量两种信号)

7. 原装进口系统与国内组装系统有什么区别?

① 相同型号的原装进口系统与国内组装系统的性能和使用方法完全相同。

② 区别在于部分配件产地、组装地不同:

原装进口系统:由美国生产,直接从美国进口(附件除外)。

国内组装系统:主要配件由美国进口,在国内进行组装、调试。

8.从哪里可以购买非损伤微测技术的实验设备——非损伤微测系统?

非损伤微测系统在中国大陆的销售工作由各地经销商负责,您可以直接联系非损伤微测系统的本地经销商,也可请直接联系旭月(北京)科技有限公司(以下简称旭月公司),由旭月公司代为安排。

9. 使用非损伤微测系统都需要哪些耗材?仪器每年运行成本是多少?

① 离子测定实验中,耗材为“玻璃微电极、选择性离子交换剂(LIX)、LIX holder”,价格详见旭月公司网站xuyue.net。

② 正常使用情况下,每次实验使用1支电极,电极制作好后使用时间大于1天;每瓶LIX能够制作250-500支电极;每支LIX holder使用时间大于10天。

③ 分子测定实验中,耗材为“极谱电极”,此电极可重复使用,使用寿命大于60小时,价格详见旭月公司网站xuyue.net。

④仪器的运行成本主要是耗材费用,正常使用情况下每年在1万元左右。

10. 非损伤微测系统的售后服务水平如何?

旭月公司拥有一只优秀的售后服务团队,除公司自身经验丰富的技术工程师外,很多国内外知名学者应邀担任了旭月公司的顾问,他们共同为客户提供各种形式的优质售后服务。

旭月公司制定了完善的售后服务流程和规章制度,客户使用非损伤微测系统使用时出现的任何问题联系旭月公司后,旭月公司都会在第一时间提供问题的解决方案。

11. 如果我暂不购买非损伤微测系统,但希望开展相关的实验,是否有可行的办法?

上文中提到的测试服务非常适合于您。旭月公司设有测试服务中心,只要您设计好实验方案,将实验样品和其他去辅助材料拿到测试服务中心,就可以比较低廉的价格 使用中心的非损伤微测系统开展实验。中心配备了专业的技术工程师,无需您亲自操作系统。具体情况请参考旭月公司主页“测试服务”模块或直接咨询旭月公司。

12. 非损伤微测系统可测量的对象有哪些?目前测试中心已检测过的样品有哪些?

非损伤微测技术可测量样品的范围较广:整体→器官→组织→细胞层→单细胞→细胞器(富集)。

迄今为止,测试中心测试过的样品种类已超过百种,包括植物类、动物类、微生物类以及非生物类,具体(图片)如下:

植物类:如根、叶片、花粉管、保卫细胞、液泡等。

动物类:如胚胎、胰岛、耳蜗组织、卵细胞等。

微生物类:如丛枝菌根、大肠杆菌、根瘤菌等。

非生物类:如镁合金、陶瓷、碳钢、铝合金等。

非生物类:如镁合金、陶瓷、碳钢、铝合金等。

13. 非损伤微测技术实验中获取的数据是什么?它们的含义是什么?

通过实例予以说明:下图为非损伤微测系统同时测定植物根K+和H+的流速时数据采集软件的截图。

图中红色的线代表H+,绿色的线代表K+,所记录数据为样品离子的流速或者是距样品两点间的电压差ΔV(μV)(纵坐标),横坐标为记录的时间,在零线上方(正值)的曲线是指离子外流(Efflux),零线下方的曲线是指离子内流(Influx),白色点是指进行了一个刺激处理,当受到刺激处理后,H+和K+的外流增加。

14.如果非损伤微测技术实验数据不够理想,一般是什么原因造成的?如何发现问题?

数据不够理想的最可能原因是被测样品的活性状态不佳,其次是配制的测试液存在问题。当然也可能是测试系统本身存在故障,但这种可能性很小,而且很容易及时发现和纠正。

为确认测试中问题产生的原因,可进行人工离子源实验。在相应的测试溶液中进行人工离子源实验,若能观察到正常浓度梯度反应曲线则基本可以排除系统故障的可能性。

注意:样品间某些离子可能存在个体间的差异,因此测试时会出现重复性不好的情况,这种情况需要从样品和测试液本身入手寻求解决的办法。

15. 在完成非损伤微测技术实验后,如何快速完成数据处理和文章撰写等工作?

实验结束后,您可以根据我们公司提供的NMT流速换算表(JCal) 及其教程完成数据处理的工作,也可以选择我公司推出的“快速数据处理服务”,充分利用我们中心长期积累的丰富经验,为您节省宝贵的时间。

撰写文章时,您可以从旭月公司主页中的“常用文件下载”中进行“文章撰写参考资料”的下载,该文件中包含NMT技术实验方法部分的常用参数资料,便于您快速、准确地获取到所需要的信息;您还可以选择我公司推出的“文章NMT方法学撰写”和“文章翻译及润色”服务,具体情况请参考旭月公司主页或直接咨询旭月公司。