主题： 藻类样品如何准备（详细）

藻类的准备也非常的简单，将藻放在其正常的生长溶液环境中（培养液），直接带到测试中心，即可进行检测。






直径大于10μm的微藻，均可实现单个检测。推荐文献C2014-007（小球藻）、C2014-019（硅藻）

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Ca²⁺作为植物细胞中最重要的第二信使，参与了植物许多逆境过程的信号转导。在非生物逆境条件下，植物细胞中的钙离子在时间、空间及浓度上会出现特异性变化，即诱发产生钙信号。钙信号再通过其下游的钙结合蛋白进行感受和转导，进而在细胞内引发一系列的生物化学反应以适应或抵制各种逆境的胁迫。N限制作为其中一种非生物胁迫被认为是影响植物生长和代谢的重要因素，藻类植物在受到氮素胁迫时会合成一定的淀粉和脂质对胁迫进行响应。作者认为这种适应胁迫的代谢过程与钙离子的信号转导过程相关。

本研究中，作者选取绿藻(Chlorella sp. C2)作为实验材料，设置BG11溶液对照组和去除NaNO₃的BG11溶液的处理组，利用NMT结合其他技术探讨藻类植物在受到N胁迫时Ca²⁺在时间、空间及浓度上的变化及离子所涉及的代谢过程调控。结果表明，绿藻的钙离子在对照组中呈外流状态，在受到胁迫的初期阶段（0-2天），N素的缺失显著的降低了钙离子的流速，在后半阶段（2-8天），钙离子的流速持续降低最终呈内流状态，且处理组和对照组差异显著(如图)。

NMT作为一种非损伤实时测定活体样品的技术，与膜片钳技术和荧光成像技术相比，能解决上述技术无法揭示离子在时间、空间变化的缺陷。在说明信号转导过程中离子的流速变化的问题上，NMT技术更是一项不可缺少的技术。

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硅藻和细菌是海洋的生物污染之一，吲哚衍生物可以很好的抑制其生长，且抑制效率高。测试溶液中加入/未加入10 mg•L-1 6-氯吲哚后，检测Ca²⁺流速。研究结果发现，6-氯吲哚处理后硅藻的Ca²⁺外排速率是对照组的10倍，而提高Ca²⁺外流速率可能是吲哚衍生物抑制硅藻生长的机制之一。这是因为Ca²⁺与硅藻的诸多生理活动相关，并且调节其附着作用。这一研究首次报道了吲哚衍生物诱导硅藻的Ca²⁺流动及Ca²⁺流速的实时变化。[/color]

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大型藻如大叶藻、江篱等，同样是单个检测。如果大型藻类样品可区分生物学顶端、基部，非损伤微测技术可实现对样品不同部位的检测。推荐文献C2012-022（大叶藻）





大叶藻是浅滩上重要的生态链组成部分。以前的研究表明大叶藻有高校的碳酸氢盐利用能力，能够通过质子分泌和形成酸化区域促进碳酸盐的利用。H⁺在这个过程中非常重要，那么同时测定光合作用的状态和H⁺流速则显得非常重要。然而，由于缺乏合适的工具，这种同时测定的想法从未实现。

2012年12月，中国科学院海洋研究所王广策实验室在《Physiologia Plantarum》发表了题为“Simultaneous measurements of H⁺ and O₂ fluxes in Zostera marina and its physiological implications”的文章。使用NMT同时测定了H⁺和O₂流速，揭示了大叶藻在碳利用的同时H⁺和光合作用的关系。实验发现50mM的Tris显著抑制了大叶藻的光合O₂释放，因为Tris能结合细胞外的H⁺。

在这个研究中，使用非损伤微测技术同时监测大叶藻的H⁺和O₂流速，以及电子传递链的速率。在稳定的光合作用期间，O₂明显外流，H⁺明显内流。Tris和呼吸抑制剂明显抑制O₂的释放。这为我们认识H⁺与光合作用的关系提供了有力的工具。

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请问，我的样品也是藻类，但是直径小于您说的10um，那我的样品可以测定吗？如果可以该如何进行检测？

不知道您的样品具体有多大，原则上NMT单个测试样品不小于5um。
如果您的样品确实比较小，建议您尝试做样品的富集培养，检测整个层面的样品，同样可以反馈分析出样品的生理状态。

藻类样品比较小，单个大小在3-5um左右，是必须要进行富集培养测试的吧？具体怎么来确定富集培养的密度呢？

关于直径3-5微米藻的富集密度，有如下建议：



1. 首先需要确认有信号

如果样品的密度太小导致信号微弱而无法检测，肯定是不合适的。




2. 在保证能够检测出信号的前提下，根据研究需要，调整密度

最理想的办法是多设几个密度，进行检测，观察各个密度下不同组内的藻样品信号差异。实际检测中，多为参考文献以及前人的经验（见下图），快速方便。

密度如何设置比较科学？最大可以设置到多少？