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【标准化专栏】水淹胁迫研究NMT标准化方案
H+流是如何贯穿水、肥两个方向成为研究核心思想的
1）C2018-056，张建华、刘鹰高，香港中文大学、山东农业大学，Plant journal，水稻，胚芽鞘，Ca2+
Natural variation in the promoter of rice calcineurin B‐like protein10 (Os CBL 10) affects flooding tolerance during seed germination among rice subspecies
2）C2018-001，许卫锋/张建华，福建农林大学/香港中文大学，Plant Physiology，根，H+/Ca2+/H2O2
Comparative analysis of Arabidopsis 26 ecotypes reveals a role for brassinosteroids in root hydrotropism
3）C2015-023，许卫锋/张建华，中科院南京土壤研究所/香港中文大学，J EXP BOT，根，H+
Involvement of 14-3-3 protein GRF9 in root growth and response under PEG-induced water stress
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Ca2+、H+、H2O2、K+
1）Ca2+生理功能概述
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2）科研案例
利用非损伤微测技术检测了两个水稻栽培品种Low88和Up221胚芽鞘以及距离胚芽鞘尖端不同距离部位的Ca2+流速，结果显示两个品种直接的Ca2+流速存在差异。结合基因表达量测定、GUS等实验结果，表明，水稻萌发过程中对淹水胁迫的适应与两种不同的OsCBL 10 启动子有关，这反过来又影响了OsCBL 10 在不同品种中的表达，并对OsCIPK 15 的蛋白质积累及其下游级联产生负面影响。
Ye NH, Wang FZ, Shi L, et al. Natural variation in the promoter of rice calcineurin B-like protein10 (OsCBL10) affects flooding tolerance during seed germination among rice subspecies. Plant J. 2018;94(4):612-625.
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1、动物样品
1）细胞
神经细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等
2）组织器官
肿瘤、皮肤、胃粘膜、胰岛、脑（海马体等）、胚胎（大鼠、鱼）、斑马鱼皮肤/鳃、耳蜗、心脏（香螺）、卵（鱼、鸡蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉组织（肌纤维、心肌）
3）其它动物样品
珊瑚、螨虫、昆虫（果蝇幼虫的肠、蟑螂血脑屏障、按蚊、长红锥蝽）、蝌蚪、水蛭、蓝蟹（微感毛）、变形虫、水丝蚓
2、植物样品
1）营养器官
根：根、根毛、根瘤
茎：边材、心材、微管形成层、木质部
叶：表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮细胞、花粉
种子：整体、胚
果实：果壳、果皮、果肉（苹果、柑橘）、籽粒、棉花纤维、棉桃
3）细胞：植物悬浮细胞、液泡
4）愈伤组织
3、微生物样品
酵母细胞、菌丝、菌落、微藻、细菌（大肠杆菌）
4、其它生物样品
周丛生物
5、非生物样品
金属、混凝土、泥沙、纳米材料、生物医药材料
非损伤微测技术最大的特点就是活体、无损检测，因此动植物材料在检测前，不需要任何的液氮速冻、染色、研磨处理等。
1、动物单细胞
因NMT是活体检测，故从培养箱中拿出来后，置于培养皿中，直接检测即可。
2、动物组织
因NMT是活体检测，无需提前处理。如检测部位天然暴露在外，如斑马鱼皮肤离子细胞、侧线毛细胞，直接检测即可。如检测部位位于体内，需在检测时暴露出检测部位（可采用麻醉的方式），后检测即可。
3、植物根茎叶等组织器官
天然暴露在外的组织器官，例如根、茎、叶的表面，无需任何处理，直接检测即可。水培、土培、砂培、平板培养均可。
4、植物原生质体/液泡
因NMT是基于微传感器/探针的非损伤检测，检测时不接触样品，故原生质体、液泡需要从组织或者细胞中，提取出来后检测。
5、植物叶片的表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
无需提前处理。因这些细胞处于组织内部，故检测时采用撕取等方式，暴露出相应细胞即可。
6、植物花粉管
离体萌发：在培养皿中萌发一段时间后即可直接检测；在体萌发：将柱头置于培养皿中，待萌发一段时间后即可直接检测。
7、植物果实
无需提前处理。如待测部位位于果实内部，需在检测前暴露出相应部位即可。
即瞬时处理，是指在检测过程中，在正常测试液中瞬间加入所需的干旱胁迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的处理方法，目的是为了观察瞬间干旱胁迫下，样品短时间内的离子/分子的变化趋势，即短时效应。
检测时，只要求待测部位浸于溶液中（无需整体都浸在溶液里）。
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可以送样检测。目前非损伤微测技术测试服务由中关村NMT产业联盟统筹管理，由遍布全国的25家NMT创新平台服务中心，提供检测服务。
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